更新時(shí)間：2022-08-12 09:12:28作者：佚名
本文格式為WORD，能編輯和復(fù)制，感謝您的閱讀。地龍脫氧核糖核酸酶的部分性質(zhì)研究及作用初探作者：**杰：目的研究地龍?bào)w內(nèi)兩種新型脫氧核糖核酸酶(LDs)的部分生化性質(zhì),并對(duì)其作用進(jìn)行初步探索。方法采用-200柱層析、毛細(xì)管等電聚焦電泳法、瓊脂糖凝膠電泳等方法。結(jié)果初步得出LD1、LD2子量為126、62kDa；確定了等電點(diǎn)分別為6.12、6.05。LD1、LD2細(xì)菌質(zhì)粒DNA、λDNA均有分解作用。結(jié)論地龍中的LDs是一種新型的脫氧核糖核酸酶。明確LDs的分子量、等電點(diǎn)有助于優(yōu)化LDs取工藝以及LDs的進(jìn)一步研究。對(duì)細(xì)菌質(zhì)粒DNA、λDNA的降解提示LDs有可能對(duì)抗細(xì)菌的耐藥性。地龍脫氧核糖核酸酶分子量(LDs).-phy,...126.05.λDNA..λ.：；；；pI地龍,又名蚯蚓,屬無(wú)脊椎動(dòng)物,環(huán)節(jié)動(dòng)物門,寡毛綱。
地龍性寒味咸,功能清熱平肝、熄風(fēng)止痙、平喘、利尿、通絡(luò)除痹。主治高熱煩躁、驚厥抽搐、肺熱喘咳、熱結(jié)尿閉以及瘡瘍膿毒等癥。國(guó)內(nèi)外研究已發(fā)現(xiàn),蚯蚓體內(nèi)有溶栓酶、蚓激酶、膽堿酯酶、過(guò)氧化氫酶[1]、溶菌酶[2]、[3]等有效成分。作為有4000余年藥用歷史的地龍,對(duì)其開(kāi)發(fā)利用還是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。本課題組致力于地龍的研究,從地龍中分離純化出脫氧核糖核酸酶樣的物質(zhì)(LDs)。本實(shí)驗(yàn)主要研究LDs分子量、等電點(diǎn),并對(duì)其作用進(jìn)行初步探索。證實(shí)LDs為新型的脫氧核糖核酸酶,具有不同的性質(zhì)。同時(shí)為L(zhǎng)Ds的研究開(kāi)發(fā)提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1.1樣品與試劑分離、純化的LD1、LD2。藍(lán)色葡聚糖2000(-2000),；,Fluka；毛細(xì)管等電聚焦試劑盒(cIEF3-10Kit)；質(zhì)粒(),由本實(shí)驗(yàn)室自備；λDNA,Sigma公司產(chǎn)品。其它所用試劑均為分析純。1.2主要儀器.2層析系統(tǒng),公司；毛細(xì)管電泳儀：。2.1分子量測(cè)定凝膠過(guò)濾層析(分子篩)法：參照文獻(xiàn)[4]方法。
2.2等電點(diǎn)測(cè)定毛細(xì)管等電聚焦電泳法：參照文獻(xiàn)[5]方法。2.3LDs對(duì)質(zhì)粒的降解作用質(zhì)粒(),分別加入LD1、LD210μL,37反應(yīng)30min后進(jìn)行0.8%瓊脂糖凝膠電泳,EB染色后分析結(jié)果。2.4LDs對(duì)λDNA的降解作用μLλDNA,分別加入LD1、LD210μL,37反應(yīng)30min后進(jìn)行0.8%瓊脂糖凝膠電泳,EB染色后分析結(jié)果。3.1凝膠過(guò)濾層析(分子篩)測(cè)定LDs分子量以標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)洗脫體積為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)分子量的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)LD1、LD2的洗脫體積,查標(biāo)準(zhǔn)曲線,并計(jì)算出用-200測(cè)得LD1、LD2分子量分別為126、62kDa。3.2LDs等電點(diǎn)的測(cè)定結(jié)果毛細(xì)管等電聚焦法測(cè)定等電點(diǎn)的結(jié)果：LD1、LD2等電點(diǎn)分別為6.12、6.05。3.3LDs對(duì)質(zhì)粒()的降解作用(見(jiàn)圖1)LD1、LD2與質(zhì)粒作用30min后電泳,EB染色觀察,LD1、LD2底降解了質(zhì)粒。倍比稀釋的LD1、LD2分解質(zhì)粒的作用減弱,可以看到仍有微弱的質(zhì)粒條帶出現(xiàn)。LDs對(duì)質(zhì)粒有明顯的降解作用,從圖1中看不出LD1、LD2對(duì)質(zhì)粒的降解作用有明顯的差別。
3.4LDs對(duì)λDNA的降解作用(見(jiàn)圖2)LDs與λDNA作用30min后進(jìn)行0.8%瓊脂糖凝膠電泳,EB染色后分析結(jié)果。LD1、LD2作用后的λDNA條帶減弱,圖2的下方有云霧狀的陰影,為λDNA的降解產(chǎn)物。說(shuō)明LD1、LD2有降解λDNA的作用。中看不出LD1、LD2對(duì)λDNA降解作用有明顯的差別。脫氧核糖核酸酶(DNase)已在不同的物種中發(fā)現(xiàn),目前針對(duì)其研究較多的是DNase、DNase。DNase是Sachs[6]1905年首次在牛胰腺中發(fā)現(xiàn),現(xiàn)對(duì)DNase的研究已擴(kuò)展到人、雞、鼠、犬及鯉魚(yú)等動(dòng)物。已純化出不同來(lái)源的DNase的分子量在32～41kDa范圍之間,等電點(diǎn)在3.9～4.7之間。DNase存在于各種哺乳動(dòng)物的組織中[7],盡管來(lái)自各種不同種屬和組織的DNase的化學(xué)性質(zhì)并不完全一樣(如分子量、亞基結(jié)構(gòu)),但這些酶的酶學(xué)性質(zhì)非常相似。迄今已純化出不同來(lái)源的DNase的分子量范圍在26.5～45kDa之間。我們發(fā)現(xiàn)的LD1、LD2分子量為126、62kDa；等電點(diǎn)為6.12、6.05。LDs與DNase、DNase分子量有很大差別,分子量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于DNase、DNase；LDs的等電點(diǎn)也明顯不同于DNase。
可以推測(cè),LDs是新型的脫氧核糖核酸酶,具有不同的性質(zhì)。質(zhì)粒是細(xì)菌染色體以外能自主復(fù)制的,雙鏈共價(jià)閉合環(huán)狀DNA。細(xì)菌對(duì)藥物產(chǎn)生抗性,原因多種。現(xiàn)在研究的熱點(diǎn)是耐藥性質(zhì)粒(其攜帶耐藥基因),質(zhì)粒可以從一個(gè)細(xì)菌進(jìn)入另一個(gè)細(xì)菌,耐藥基因也從一個(gè)細(xì)菌傳到另一個(gè)細(xì)菌,致細(xì)菌耐藥性的廣泛產(chǎn)生。噬菌體是感染細(xì)菌的一類病毒,有的噬菌體基因組較大,如λ噬菌體和T噬菌體。λ噬菌體由外殼蛋白和λDNA(線狀雙鏈DNA分子)組成。通過(guò)溶原性方式λDNA能整合到細(xì)菌染色體DNA中,與λDNA相毗鄰的細(xì)菌基因有可能被噬菌體從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到另一個(gè)細(xì)胞(即轉(zhuǎn)導(dǎo)),使遺傳性狀在不同細(xì)菌個(gè)體間傳播。本實(shí)驗(yàn)表明,LDs能降解耐藥質(zhì)粒和λDNA,推測(cè)LDs有可能阻斷細(xì)菌遺傳形狀的改變(如細(xì)菌的耐藥性)。LDs徹底降解了質(zhì)粒,同樣條件下對(duì)λDNA是部分分解。λDNA為,遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于質(zhì)粒(：),LDs降解λDNA較質(zhì)粒會(huì)困難些。在臨床上重組人DNase()已用于治療支氣管擴(kuò)張、肺膿瘍等。現(xiàn)認(rèn)為重組人DNase可以分解黏液中的DNA,減輕炎癥從而發(fā)揮作用[8]。提示作為一種新脫氧核糖核酸酶的LDs 同樣有可能對(duì)抗炎癥,起 到治療作用。
LDs 是新蛋白質(zhì),是蚯蚓開(kāi)發(fā)的新思路。本實(shí)驗(yàn)研究了LDs 的部分性 質(zhì),為L(zhǎng)Ds 的深入實(shí)驗(yàn)及開(kāi)發(fā)利用做了鋪墊。LDs 的研究可以為地龍治 療肺熱喘咳、熱結(jié)尿閉以及瘡瘍膿毒等癥提供理論依據(jù)。 【教育出版社,1991.30－37. from imply wide [J]. Eur [J]. 李建武,蕭能賡,余瑞元,等.生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)原理和方法[M].北京：北京大學(xué)出版社,1994.209－211. 郭堯君.蛋白質(zhì)電泳技術(shù)[M].第2版.北京：科學(xué)出版社,1999.125 －132. etal. gene： mouse[J]. J,2004,380(Pt 3)：929－937. etal. Human urine (DNase ： , , among [J]. Acta,1992,1119(2)：185－193. , etal. human DNase [J]. Proc Natl Acad Sci USA,1990,87(23)：9188－9192. 本文檔由:文檔精靈() 編輯和上傳. 若有圖片顯示不完整脫氧核糖核酸酶脫氧核糖核酸酶，下載后，把圖片拉小就可以完整顯示了. 若內(nèi)容有缺省，可能因?yàn)閮?nèi)容過(guò)多。下載聯(lián)系本人.